豬α-1,3-半乳糖轉移酶基因打靶載體的構建

目的:構建豬α-1,3-半乳糖轉移酶(GGTA1)基因的正負篩選打靶載體.方法:以原代豬胚胎成纖維細胞基因組DNA為模板,采用長程PCR方法擴增出GGTA1基因的2條片段;以長約2 kb包含部分第9外顯子的片段為同源短臂,在Xba Ⅰ和Cla Ⅰ位點插入pLoxP質粒正篩選標記neo基因的3'端;以長約5.4 kb包括部分第8外顯子、全部第8內含子及部分第9外顯子的片段為同源長臂,于Not Ⅰ位點插入該質粒中neo基因的5'端;2.7 kb的負篩選標記tk基因位于載體中同源短臂的3'端外側.結果與結論:酶切、PCR及測序結果表明,同源臂被正確連接至質粒pLoxP,成功構建了豬GGTA1基因正負篩選打靶載體pSL/GT.

作 者： 常宏宇 宮鋒 季守平 鮑國強 李素波 章揚培 李芳 聶亞玲 CHANG Hong-Yu GONG Feng JI Shou-Ping BAO Guo-Qiang LI Su-Bo ZHANG Yang-Pei LI Fang NIE Ya-Ling   作者單位： 常宏宇,CHANG Hong-Yu(第二炮兵總醫(yī)院,兒科,北京,100088;軍事醫(yī)學科學院,野戰(zhàn)輸血研究所,北京,100850)

宮鋒,季守平,鮑國強,李素波,章揚培,GONG Feng,JI Shou-Ping,BAO Guo-Qiang,LI Su-Bo,ZHANG Yang-Pei(軍事醫(yī)學科學院,野戰(zhàn)輸血研究所,北京,100850)

李芳,聶亞玲,LI Fang,NIE Ya-Ling(第二炮兵總醫(yī)院,兒科,北京,100088) 

刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號： Q78  關鍵詞： α-Gal表位   豬α-1,3-半乳糖轉移酶   基因打靶   異種移植  

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