修飾的含前S1、前S2免疫決定簇乙肝表面抗原融合多肽在畢赤酵母中的共表達

用BamHⅠ和BglⅡ雙酶切合SS2嵌合基因片段的重組質粒pAO815-SS2,分離含AOX1啟動子區(qū)、SS2嵌合基因和AOX1轉錄終止序列的表達盒.將分離的BamHⅠ-BglⅡ表達盒與經BamHⅠ線性化的pAO815-SS1質粒連接,轉化大腸桿菌Top10F',提取質粒,用BamHⅠ和BglⅡ雙酶切分析重組質粒并篩選正向插入SS2表達盒的重組子.將該重組質粒用電轉化法導入Pichia pastoris GS115細胞,經表型篩選、小試表達和產物鑒定,構建了重組表達菌株GS115-SS1S2.重組菌株經甲醇誘導后制備抗原粗提液,進一步進行ELISA和Western blot鑒定.ELISA結果顯示,產物同時具有S、前S1和前S2抗原性.Western blot分析進一步表明,表達產物既能與S抗體結合,也能與前S1和前S2抗體結合.工程菌經高密度發(fā)酵,表達量達到300～600mg/L.抗原經純化后進行電鏡觀察,形成直徑20～35nm的球形顆粒.純化抗原經SDS-PAGE分析,SS1和SS2多肽仍然保持完整,基本無降解.

作 者： 譚昌耀 蔣麗明 葛永紅 袁進 金甌 胡波 TAN Chang-Yao JIANG Li-Ming GE Yong-Hong YUAN Jin JIN Ou HU Bo   作者單位： 成都生物制品研究所生物技術研究室,成都,610023  刊 名： 生物工程學報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分類號： Q786  關鍵詞： 前S1   前S2   嵌合基因  

【修飾的含前S1、前S2免疫決定簇乙肝表面抗原融合多肽在畢赤酵母中的共表達】相關文章：

白蛋白融合α-2b干擾素在畢赤酵母中的表達04-27

人血清白蛋白-C肽融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達04-27

虎紋鎮(zhèn)痛活性肽在畢赤酵母中的分泌表達04-28

乙酰肝素酶大亞基在畢赤酵母中的表達04-30

人β干擾素-血清白蛋白融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達04-28

家蠅防御素defensin cDNA的克隆及在畢赤酵母中的表達04-30

克魯維酵母中外切菊粉酶基因在畢赤酵母中的表達研究04-29

草魚生長激素基因在畢赤酵母中的表達04-27

在畢赤酵母中表達人溶菌酶蛋白的研究04-27

鈣網蛋白-N58在畢赤酵母中的表達及活性分析04-27